脊髓损伤治疗新进展

脊髓损伤的治疗是世界性难题，我们根据世界脊髓损伤的最新进展，结合大量的临床经验提出新的治疗方案——新型水凝胶包裹脊髓中间管膜下神经干细胞联合促红素（rhEPO）及脑源性神经生长因子（BDNF）治疗急性脊髓损伤并对内源性神经干细胞激活方式进行了系统化研究。我们将利用此平台逐步公布研究的初步成果。以便与同行交流讨论，广纳贤言。

自Reynolds 等从鼠的神经组织中提取出了具有分化潜能的神经干细胞（neural stem cells,NSCs），脊髓损伤的治疗走上了细胞治疗的道路，给脊髓损伤的治疗带来了希望。神经干细胞是神经系的多能细胞，在体外培养中有较强的自我更新及扩散能力，成体和幼体的中枢神经系统均存在神经干细胞，包括第四脑室、前脑侧脑室、海马齿状回及脊髓中间管的室管膜下层。

本课题组从6周龄SD大鼠脊髓中间管膜下提取出神经干细胞行体外培养，完成鉴定工作后再进行下一步实验。

提取出的原代脊髓神经干细胞培养4天后即可见较多的不规则小神经球(Neurosphere)形成，其中包含大量的神经干细胞。

原代细胞培养7天后，即可见很多规则的圆形神经球，体积较4天原代细胞明显增大。

为确保提取出来的是神经干细胞，本课题组分别从细胞团和单悬浮细胞两种细胞聚集状态对培养细胞做以下指标鉴定。

1、Nestin：巢蛋白。一种中间丝蛋白，特异性表达于神经上皮干细胞，仅在胚胎发育早期的神经上皮表达，出生后表达就停止。为神经干细胞的特征性标志 物。Nestin 有时也在非神经干细胞群表达，如胰岛祖细胞及造血祖细胞。巢蛋白是神经干细胞经典的表达产物，一般出现在神经干细胞的胞质内。2、 Sox-2：又名SRY (sex determining region Y)-box 2，维持未分化干细胞包括胚胎干细胞和神经干细胞的自我更新能力或多能性非常重要的一个转录因子。神经干细胞的标记物之一。这个标志物主要作为证明被测细 胞具有干细胞性的自我更新及多能性分化潜能的一个标志蛋白，在神经干细胞中一般表达在细胞核内，因此会和Hoechst33342显色重叠。3、Hoechst33342：是一种常见的细胞核染料。

神经球染色

神经干细胞悬浮单细胞染色

如染色结果所见，本课题组提取出的正是神经干细胞，其他结果（包括促红细胞生成素对神经干细胞的影响等）将逐一上传。