intraventricular hemorrhage,IVH是指由非外伤因素导致颅内血管破裂、血液进入脑室系统引起的综合症。其发病率很高且逐年增加,约占自发性颅内出血的20%~60%左右。脑室内出血常分为原发性脑室内出血(PIVH)和继发性脑室内出血(SIVH)两类,常见的病因为高血压动脉硬化、颅内动脉瘤、脑动静脉畸形、烟雾病等。脑室内出血是一种危害性较大的急症,起病急骤,且重度脑室出血病死率极高,无论保守治疗还是单纯脑室引流疗效均不理想。临床一般表现为剧烈头痛、频繁呕吐等颅内高压症状,重者可出现严重意识障碍和植物神经功能紊乱,晚期可出现脑疝、去大脑强直、呼吸循环障碍。脑室出血越多,患者生存率越低。影响生命预后的主要因素取决于脑室积血程度和脑脊液循环梗阻情况,有研究表明脑室扩张程度与最初脑室内血凝块的体积呈线形正相关,早期脑室扩张是脑室内血凝块的直接扩张作用所致,可进一步引起室管膜的损伤而使脑室扩张加重和恶化。后期脑脊液吸收的障碍及血凝块的溶解可造成脑室的进一步扩张。所以及时清除脑室内积血促进脑脊液循环通畅是降低病死率、提高患者生存质量的关键。 由于单纯的脑室外引流常会因积血形成铸型血凝块以及血凝块堵塞引流管,造成引流不畅,达不到引流的目的。加之血凝块虽可自行溶解,但所需时间较长,血凝块的持续存在不仅可使脑室持续不断的扩张,而且可直接造成脑脊液循环障碍及分解释放毒性物质引起一系列相关的脑损害。侧脑室穿刺置管尿激酶灌洗溶解血凝块及腰大池置管持续引流的方法可以紧急解除脑积水和脑室膨胀,降低颅内压,可尽早清除部分脑室积血,可使血肿迅速溶解,打通脑室通路,解除脑脊液梗阻,缓解扩大的第Ⅲ、Ⅳ脑室对周围重要脑组织的压迫,改善其周围的微循环根据患者病情在全麻下或局麻下行出血少的一侧侧脑室穿刺或行双侧侧脑室穿刺外引流术。采取侧脑室前角穿刺,置入内径1mm的无菌静脉输液管于脑室内1.5~2.5cm深,术后接溶有尿激酶4-10万u的生理盐水约200ml缓慢滴入脑室内,速度按2~4滴/分控制。根据脑室内积血情况,引流量和色泽变化确定尿激酶及引流天数,一般1周左右拔除脑室内引流管。10~12天左右在腰大池引流的脑脊液明显变淡清亮后,拔除腰大池引流管。期间密切观察患者病情变化,必要时立即复查头颅CT。脑室外引流管的通畅情况是是否能尽快溶解血凝块的关键,而腰大池穿刺置管持续外引流管的通畅情况是是否能尽快引流血性脑脊液、促进脑脊液循环的关键。为避免血凝块堵塞脑室引流管,必要时可行双侧脑室外引流;引流过程中尤其要注意引流情况,防止堵塞保持引流通畅,以及引流过度致再出血可能;根据颅内压和引流量的变化调整引流高度。 在经头颅CT复查血凝块基本清除后,应及时拔除脑室外引流管,以免造成颅内感染可能。在治疗中因脑室出血本身可造成严重的脑损害,产生严重的意识障碍、中枢性高热、应激性溃疡、感染、水电解质酸碱平衡紊乱等严重的并发症,在引流的同时,应积极主动控制原发病及预防、治疗并发症。遗有脑积水症状者可行脑室腹腔引流术。 高血压和动脉瘤为继发性脑室出血的两大主要病因,其中高血压性脑室内出血以丘脑、基底节区出血破入脑室为多见,动脉瘤性脑室出血以前交通动脉瘤为多见。因此,患者病情平稳后,有条件者应行脑血管造影(DSA)检查以排除颅内动脉瘤可能。怀疑动脉瘤性出血者,应避免引流过快、过量致动脉瘤再次出血。高血压性脑出血者如以脑内出血为主,则须先处理脑内血肿。 本疗法采取侧脑室及腰大池穿刺对口灌洗引流,同时侧脑室内滴注尿激酶溶解血块,能够及时清除脑室系统的积血,促进脑脊液循环通畅,减轻了对脑膜、脑血管的刺激,提高了抢救成功率,减少了并发症。笔者认为,脑室穿刺置管尿激酶灌洗溶解血凝块及腰大池置管持续引流的方法是治疗脑室内出血的有效方法之一。该方法治疗脑室出血是一种较为简便,损伤较轻,疗效较好,安全可行的治疗措施。
国外许多神经外科医生在临床工作中,都从事显微神经外科解剖学研究,美国一些神经外科实验室长期进行神经显微外科解剖研究和神经外科住院医培训,如佛罗里达大学神经外科A.L.Rhoton研究室和华盛顿大学神经外科L.N.Sckhar实验室,对显微神经解剖进行了大量的研究,富有成果。美国神经外科杂志设有显微外科解剖专栏。每年二次的北美神经外科年会(AANS和CNS)长期进行显微神经外科解剖及手术入路讲座和学习操作训练,此外日本、法国、德国和巴西都有神经外科医生举行的神经外科显微解剖专门学术会议,并有全国神经外科学会显微神经解剖专业组织,定期举办显微神经解剖培训班,对神经外科医生训练和培训。如瑞士M.G.Yasargil长期从事脑血管的显微外科解剖研究,并首先在他的实验室做颈内外动脉血管吻合研究,并在1967年用于临床治疗脑缺血病人,开创脑缺血外科治疗新方法。德国J.lang和M.Samii首先在实验室做颈静脉孔区的显微外科解剖,用磨除岩骨后坡和弓状隆起方法,采用乙状窦前入路切除岩骨和斜坡肿瘤,这种入路减少了颞叶和小脑的牵拉,缩短了从颞下入路的手术距离,直接显露病灶并能观察到脑干的前方和外侧,很好保留了耳蜗、迷路和面神经等岩骨内走行神经和耳蜗结构,而又避免乙状窦、横窦和Labbe静脉等损伤,大大提高了斜坡肿瘤的手术效果。神经显微外科解剖所用的头颅标本应尽可能接近显微外科手术所见的正常手术野情况,以新鲜尸体头颅标本最佳,用清水或洗涤剂反复冲洗颅内动、静脉内淤血。然后分别把动、静脉灌有红和蓝染色的可塑性硅胶,充盈、铸形,使之接近正常形态的血管结构,这不仅有利于解剖观察和测量研究,而且标本血管有一定强度和弹性和防止腐败作用。制备后的标本应显示出1毫米以上的细小动静脉,才符合显微神经外科要求. 神经显微外科手术改变了以往肉眼手术方法,其手术视野的放大,手术操作的精细,使以往难以想象的颅内重要结构区域也可能做到病灶切除,且病人恢复良好。无创伤、微侵袭已是神经外科技术研究的方向。这些除了需要系统和局部神经解剖学基础外,尚要以显微神经外科解剖研究为基础,这与以往的神经解剖学研究有所区别,依据颅内一定部位和病灶的特征,用显微外科技术方法研究颅骨、颅神经、血管和各部脑结构关系。利用这些结构本身裂隙、孔洞和相互之间的夹角,提出手术入路和切除病灶的方法。如把乙状窦在颈静脉孔周围岩骨磨除,乙状窦后牵,切除斜坡和桥脑前和侧方病变的乙状窦前手术入路。经额颞开颅,分开侧裂到鞍上和鞍旁的手术入路研究,能使90%以上的前循环动脉瘤手术夹闭。并对岛叶、丘脑及基底节部位病灶也是一种良好的手术入路。分开侧裂后部,岛叶与颞叶裂也是到颞角和海马部位的相对无损伤的手术经路,海马与丘脑脉络膜裂又是到达环池的无损伤手术入路。穹隆与丘脑顶部在侧脑室内的脉络膜下形成开放全部三脑室的脉络膜裂,其分开裂隙可充分显露第三脑室,成为目前的三脑室手术入路。在海绵窦内穿行的颅神经与反折硬膜和颅底一些骨性结构形成许多显微外科解剖三角,利用这些三角间隙可使血管、神经走行复杂的海绵窦内及其周围病变完全切除,并可避免其血管神经损伤。如Parkinson氏三角,是切除海绵窦内病变的精典手术入路。Glasscock氏三角是到内听道迷路和颈内动脉岩骨段病变的手术入路。Kawase氏三角,是到内听道、桥小脑角、桥脑外侧病变的手术入路。海绵窦外侧三角是到蝶窦、颞下窝和上颌窦后部病变的手术入路。 目前显微神经外科越来越受到神经外科医生的重视,仅使用手术显微镜处理颅内病灶是不够的,尚要掌握和运用显微外科技术和显微外科解剖理论,才能促进神经外科治疗水平提高。
瑞典一项医学报告指出,发自移动电话的辐射可能对使用者的脑部产生危害,其中包括出现老人痴呆症等。这给移动电话辐射有害的说法又增加了一个佐证。 在实验中,瑞典隆德大学的研究人员用类似发自移动电话辐射的微波脉冲去照射老鼠。在两分钟内,由于防卫机能失去作用,研究人员发现老鼠的脑组织“打开”了,血液内有损害性的蛋白质及毒素因此轻易地进入。同样,只要紧挨着来自移动电话的辐射波下两分钟,人体内防止血液内有伤害性蛋白质及毒素进入脑部的防卫机能也就会丧失作用。而有伤害性的蛋白质一旦进入脑组织,患上脑部及神经疾病,例如老人痴呆症、帕金森症以及出现多重硬化症的危险就将增高。 移动电话制造商们此前一直强调手机辐射量是符合安全指标的。这项研究令人对目前世界卫生组织所制订的安全指标产生了怀疑。专家们建议,最好不要等到手机辐射有害被完全证实后才采取防范措施。 据英国《星期日泰晤士报》报道,德国Essen大学的几位研究人员近日声称,经常使用手机的人患上眼癌的可能性是较少打移动电话的人的三倍,这是科学家第一次发表手机辐射可致癌的正式声明。此前,有科学家指出,手机辐射可导致大脑细胞暂时受损,这次却是科学家首次指出频繁使用手机可对人体产生永久性伤害。 如果上述研究结果得到进一步研究的证实,那些经常使用手机而且已患上眼癌的病人将向手机公司提出数千份诉讼。 据报道,上述科学家在实验中对一种名为恶性黑素瘤的眼癌进行了研究,这种眼癌患者的虹膜及视网膜上长有黑素瘤,可导致眼睛失明及视力下降。研究人员之一安德雷斯-斯唐博士表示,他在实验中对118名患有这种眼癌的病人进行了研究,并询问了他们使用手机的情况,然后与一些未患这种疾病的人进行了比较,结果发现前者使用手机的频率远远高于后者。 到目前为止,使用手机如何导致眼癌这一问题的具体原因尚不清楚,但据科学家称,由于人体眼睛的内部环境较为湿润,因此有助于手机辐射的吸收。
维他命的主要概述功能Vitamin的主要功能: 1.当coenzyme ,precursor 2.参与抗氧化的防御系统3.基因的调节4.特殊的功能,ex:vit A=>维持视觉的功能Vitamin的结构相似-->在营养上的功能差不多,Ex :tetrahydrofolic acid and folic acid 都有叶酸的功能但是因为结构(form)不同,稳定度有很大的差别Vitamin若1.过度补充 2.食品内过度添加 =>会产生毒性(Toxicity)Restoration(复原) : 增加一些加工时所流失的营养素,以达到原来的浓度Fortification(强化) : 食品中添加营养素,其添加量会超过原有的量Enrichment(强化) : 添加是为了达到某一标准,ex : FDA的标准Nutrification(强化) : 只要任何营养素添加在里面即可称做NutrificationFDA提出添加营养素的原则 :营养素添加在食品内,在储存,运送,使用过程中要确定其处於安定的状况营养素添加在食品里必须是我们身体所能利用的在一定浓度内不会过量适当合理的添加,而且要符合规定叶酸跟胎儿神经管的发育有高相关,but,摄取过多folate会盖住vit B12的功用Vitamin分析方法受限的原因 :用传统化学方法分析,会缺专一性微生物分析易受干扰从食物中萃取vitamin的量不完全Vitamin有很多不同种的form影响Vitamin 生物利用率的因素 :一餐中的食物组合会影响Vitamin生物利用吸收的情况Vitamin的型式饮食中其他成份,可能会跟vit.产生interaction ,ex : Protein , Starch饮食中含Vitamin的提供是否足够,要考虑几点 :食物中本来Vitamin浓度多寡Vitamin产生的化学特性,在酸性环境每种Vitamin的利用率不同造成食物中Vitamin的变化和流失 :本来食物中内Vitamin含量就会有所改变(种植过程)植物中Vitamin含量—由synthesis and degradation决定synthesis > degradation =>Vitamin的浓度提高动物中Vitamin含量—因为饮食而影响or生物控制机制的影响在储藏过程中, Vitamin亦会改变.和内含的enzyme会有相关性(收成上的改变)前处理造成流失 ,ex : 萷皮(Trimming),冲洗(Washing),研磨(Milling)p.s.叶酸, Vitamin C 在酸性下稳定,在碱性溶液中易流失制备,杀青,加热过程会影响Vitamin的流失p.s.1 Blanching主要是为了去除enzyme的活性,抑制一些反应,会伴随Vit.流失p.s.2 Vitamin C若有金属离子存在,其氧化速率会加快加工过程亦会造成Vitamin流失p.s.用何方法可减少加工造成的流失 :降低温度,减慢反应速率(降低Aw)把氧去除 改变PH值食品中本来存在的其他物质(other food components)也会影响流失p.s.食品中的其他物质,何者会影响Vitamin的安定性 氧化剂存在Vit.A ,Vit.C …易受氧化破坏还原剂存在保护Vitamin氯的存在会破坏Vitamin硫的存在会破坏Vit.B1 ,可当防腐剂,抑制酵素性褐变亚硫酸根存在减少Vitamin含量PH值PH值下降对Vit B1 ,Vit C有安定作用导致carotenoid , retinol流失的因素 :加工使trans-form cis-form酸性环境易流失含氯溶剂有氧加热(使trans cis)光在低氧浓度( 1.0~0.4atmVit C的氧化速度和氧浓度成正比<0.2 atm Vit C的氧化速度和氧浓度无关Fe 3+ 若和EDTA结合,Vit C氧化速率增加4倍Cu++ 若和EDTA结合,会抑制Vit C的氧化DHAA在PH = 2.5~5.5时较稳定在无氧状态下,Vit C不易分解,but,无氧状态下,若有金属离子会加速分解Vit C在食品加工对食物的color提供,有很大的相关性Ex : 1. DHAA + amino acid sorbamic acid(暗红或黄色)3,4-dihydroxy – 5-methyl-2(5H)-furanone (褐色)Vit C的分解产物和 a.一些风味物质有关 b.其分解产物的聚合参与非酵素性褐变Vit C在食物中的功用 :抑制酵素性褐变 还原面粉调整剂的活性保护易氧化的compound ex : folate抑制nitrosamine的形成还原金属离子 ex: Fe 3+ Fe 2+ Thiamin(Vit B1)—易受PH值影响,PH值越高越不安定 . Protonated最安定易造成Vit B1流失的原因 :B1易留在水溶液内易受PH值影响,尤其在中性或碱性溶液易流失在含硫制剂的存在下,会增加Vit B1的分解Aw会加速Vit B1分解的物质 :ThiaminaseHeme proteinTanninFlavonoidCarbohydrateProteinChlorine室温(<37℃) , Vit B1的流失不会随著Aw增加而增加 ,but,当温度升高到45℃Vit B1的流失会随著Aw上升而增加流失Vit B1分解後会产生肉的香味,其为含硫的产物Riboflavin (Vit B2)—主要功能为 "参与氧化还原反应"影响Vit B2的稳定性 :PH值—在酸性环境下, Vit B2较稳定Aw—在monolayer value时最安定,如果超过加速分解光—会造成Vit B2分解成lumiflavin , lumichrom 失去活性 ex : milkVit B2的coenzyme—FMN and FAD牛奶受光照射产生不好的味道是因为 :牛奶中Vit B2受光分解Methionone methional牛奶中脂质受到氧化Niacin—最主要功能为 "参与去氢反应" ,可由tryptophan转变过来 Niacin易在水溶液中流失,其coenzyme—NAD , NADPVit B6—最主要功能为 "coenzyme" ,其coenzyme为PNP , PMP , PLPVit B6的compounds加上glucoside无活性 ; 加上phosphate 有活性p.s. Vit B6的compounds : Pyridoxal , Pyridoxamine , Pyridoxine 何者会影响Vit B6的稳定度 :光—使Vit B6进行氧化,产生free radical 中间代谢产物温度—Temp.上升 破坏增加PH值—低PH较安定牛奶在加工过程中,Vit B6有40%~60%会流失 ,所以要添加,而添加的form大都为PN ,如果Vit B6不足 易造成抽筋◎一般一餐的混合食物中Vit B6的生物利用率大概有75%左右
中枢神经系统疾病中蛋白质组学研究进展罗庆勇摘要 中枢神经系统疾病如脑肿瘤、创伤、脑血管疾病等发病率高,对人体的危害大。以往在中枢神经系统疾病的研究中,主要是在设定假说的基础上, 在某种程度上限制了脑这一复杂器官疾病的研究进程。近些年来随着蛋白质组学及相关技术的发展,为高通量地筛选疾病相关蛋白提供了强有力的手段。随着近几年中枢神经系统蛋白组学领域的深入研究,在中枢神经系统疾病诊断、个性化治疗、疫苗开发等方面都有着广泛的前景 。关键词: 中枢神经系统疾病;蛋白质组学;前景 21 世纪初, 人类基因组计划基本完成。基因组学( genomics)是一门研究基因组结构和功能的科学,它是对相对稳定DNA的静态研究。蛋白质组学是对一个基因组或一种细胞、组织、器官所表达的全部蛋白质成分的分析。哺乳动物中30% ~50%基因在中枢神经系统表达[ 1 ] 。不同的基因表达出各种不同的神经表型,从而在基因水平上决定了大脑组织的复杂性。蛋白质组学能帮助我们研究复杂的大脑,了解神经系统紊乱状况和相应的分子生物标记物。本文就最近几年中枢神经系统疾病中蛋白质组学相关研究进展做一简要综述。中枢神经系统疾病如肿瘤、创伤、脑血管疾病、精神性疾病、神经退行性疾病等发病率高,对人体的危害大,常危及生命或使患者劳动力丧失、生活质量下降。以往在中枢神经系统疾病的研究中,主要是在设定假说的基础上,验证某个或某些基因及蛋白在疾病中的表达和可能作用,无法实现高通量的研究,在某种程度上限制了脑这一复杂器官疾病的研究进程。近些年来随着蛋白质组学及相关技术的发展,为高通量地筛选疾病相关蛋白提供了强有力的手段。虽然中枢神经系统疾病蛋白质组学的研究还处于起步阶段,但在阐明发病机理、筛选诊断、监测、预后指标等方面已经取得丰硕的可喜成果。1. 蛋白质组学研究现状及研究方法蛋白质组是指一个基因,一种生物或一种细胞, 组织所表达的全套蛋白质。蛋白质组学是指对一个细胞、组织、有机体在一定时间内表达的所有蛋白质(总蛋白质),即蛋白质组进行系统的、全面的研究。蛋白质组的研究远比基因组研究复杂。一方面,蛋白质的数目远大于基因的数目,是由于基因的拼接和翻译后修饰造成的;另一方面,基因是相对静态的,一种生物体仅有一个基因组,而蛋白质是动态的,随时间和空间的变化而变化[2]。。双向电泳、计算机图像分析与大规模数据处理技术以及质谱技术被称为蛋白质组研究的3大支撑技术. 双向凝胶电泳是目前惟一能将数千种蛋白质同时分离与展示的分离技术。在双向凝胶电泳中,蛋白质首先根据等电点的不同在一向等电聚焦电泳中分离,接着被转移到二向聚丙烯酰胺凝胶上,再根据相对分子质量的大小不同被分离。经双向凝胶电泳分离后,染色,得到蛋白质表达谱。采用计算机图像分析技术对图谱上的蛋白点进行定位、定量、图谱比较和差异点寻找等。尽管双向凝胶电泳在蛋白质组研究中已被广泛应用,但这种方法还存在局限性。首先,虽然固相化PH梯度等电聚焦电泳技术的出现已使双向凝胶电泳的重复性得到改善,但重复性仍然是双向凝胶电泳方法存在的主要问题。同样的操作人员,同样的样品,同样的仪器,几次操作,所得到的双向凝胶电泳图谱很难一模一样;其次,双向凝胶电泳分析时部分蛋白质的丢失,特别是疏水性蛋白质和相对分子质量大于10×103蛋白质的丢失,使得双向凝胶电泳作为通用的蛋白质分离展示方法有一定局限性。对于一些低丰度蛋白和极端PI值的蛋白不能很好分离[3] ; 再次,通过双向凝胶电泳分离的蛋白点不一定只代表一种蛋白. 另外,为了寻找更有效的蛋白质组研究方法,人们根据DNA 微阵列技术方法,将蛋白质固定在一些固相物质上,做成蛋白质微阵列,从而产生了蛋白质芯片技术。2 蛋白质组学在中枢神经系统疾病研究中的应用2. 1 神经退行性疾病( neurodegenerative disease)神经退行性疾病是一类严重影响人类健康的常见病,其主要病理改变是神经元的突起明显变短或消失、神经细胞凋亡。此外, 甲基苯丙胺等成瘾性药物滥用者的大脑也可出现以神经退行性病变为特征的改变[ 4] 。阿尔茨海默病(Alzeimer disease, AD)是一种较典型的神经退行性疾病,AD 死亡患者的海马、颞叶等部位脑组织中共发现411 种差异蛋白质,其中37 种被鉴定,分别和突触传递、热应激和氧化应激、脂质转运和代谢以及糖代谢有关,认为这些机制均和AD的发病有关[ 5 ] 。2. 2 中枢神经系统肿瘤蛋白质组学在筛选中枢神经系统肿瘤标志物, 探讨神经肿瘤发病、转移机理,寻找预后指标等方面的应用,是近年肿瘤蛋白质组学研究的热点。在胶质瘤的研究中, 通过2D 电泳比较胶质瘤和正常脑组织的蛋白质表达差异,发现胶质瘤中有11 个点表达上调, 4 个点表达下调,一组和细胞骨架相关的蛋白在胶质瘤发生调制性改变,提示细胞骨架的调制在胶质瘤发生中的可能作用。脑脊液成分的变化和中枢神经系统微环境的改变密切相关,可通过活检获得,是中枢神经系统疾病蛋白质组学研究的良好材料。在原发性脑肿瘤患者的脑脊液中发现2 种肿瘤相关的候选蛋白: N -myc肿瘤蛋白(N-myc oncop rotein)和低分子量钙介体蛋白( low molecula weight caldesmon,l-CaD ) 。这些蛋白有可能作为肿瘤检测标志物 、 肿瘤预后指标和化疗监测指标[6]。2.3 脑血管疾病脑卒中 Suzuyama等[7]研究了短暂性大脑中动脉闭塞的大鼠模型中脑脊液蛋白质组的改变。用表面增强激光解析及电离飞行时间质谱来检测短暂性脑缺血后的脑脊液蛋白谱的时程改变。据报道,载脂蛋白CI和载脂蛋白CⅢ是最先被报道的在小样本中能够充分区分缺血性和出血性脑卒中的血浆标志物。2. 4 中枢神经系统创伤中枢神经系统损伤后可引起一系列复杂的细胞损伤和抗损伤反应,基因水平的变化导致多种蛋白质的表达是这种反应的基础。已证明应用特异的阻断剂阻断机体的损伤性反应,可以改善脑损伤患者的认知功能。高通量研究损伤后的蛋白表达变化,有可能为中枢神经系统损伤的监测和治疗提供新的靶标。人脑创伤后脑脊液中α1 抗胰蛋白酶、结合珠蛋白α1、α2、β等急性期反应蛋白含量增高,而纤维蛋白原β羧基末端降解产物仅在创伤组检测到, 可能作为中枢神经系统创伤的诊断标志物[ 8] 。2.5 精神疾病 在当今社会精神疾病发生率较高, 疗效差, 复发率高, 归根结底精神疾病为多因素致病, 缺乏客观的诊断标准。严重的精神疾病, 已证实伴有脑功能障碍。Johnston - Wilson等[ 9 ]取根据DSM - Ⅳ确诊为双相情感障碍( bipolar disorder) 、抑郁症(major dep ressive disorder) 和精神分裂症( schizophrenia) 的89例尸体脑组织前额皮质(Broddman10区) 匀浆, 经2 - DE分析, 氨基酸测序, 发现了8种与疾病相关的蛋白质,这方面的相关研究还在进一步深入之中,有望在蛋白质组学方面取得突破。2.6 其他中枢神经系统疾病:在其他中枢神经系统疾病中,脑组织蛋白质表达也存在相应改变。Lewohl等[ 10 ]对酒精依赖性患者额叶脑组织蛋白质表达研究发现,有182个蛋白质和正常脑组织有显著差异,其中139个蛋白质表达显著降低, 35个蛋白质表达显著升高,有8个是新发现或消失。迄今为止已确认了其中63个蛋白质。这些变化表明酒精依赖性患者脑组织在分子水平上已经发生变化,同时也说明蛋白质结构与功能密切相关。癫痫是一种神经科常见疾病,以中枢神经元过度放电为特征,但发病机制不明。为揭示其发病机制, Eun等[ 11]研究颞叶癫痫患者大脑皮质蛋白质的表达变化,和正常对照相比,通过蛋白质印迹分析发现线粒体型锰超氧化物歧化酶的表达显著下调,说明线粒体型锰超氧化物歧化酶与癫痫发病机制密切相关。这对研究癫痫的发病机制提供帮助,并有可能成为药物治疗癫痫的新靶点。3.展望前景中枢神经系统蛋白组学, 在疾病诊断、个性化治疗、疫苗开发等方面都有着广泛的前景[ 12 ] . 蛋白质组学已广泛应用于基础与临床研究,包括细胞生物学、神经生物学、药理学和临床诊断学等的研究,其基本技术方法为双向凝胶电泳和质谱分析,现在研究的蛋白质主要集中在蛋白酶、细胞骨架蛋白、热休克蛋白质、突触小体蛋白、抗氧化剂蛋白和一些受体蛋白。蛋白质组学因其研究的是直接执行生命活动的蛋白质,是我们探索疾病病因、发病机制、病理分期、判断预后、药物开发等有力工具。蛋白质组学作为一种新兴的检测技术也有其局限性, 如对低丰度蛋白质的检测存在技术难题,还不能满足大规模蛋白质分离要求[ 13 ] ,双向凝胶电泳和质谱法不能分析疏水蛋白和鉴定出成千上万的蛋白质[ 14 ] ,其技术的复杂性和不成熟限制其在临床上的广泛应用。随着技术的发展,未来的蛋白质组学应具有自动化、高通量和高特异性等优点。大脑的复杂性以及蛋白质组的动态变化是研究脑组织蛋白质组学的一大难点。大脑结构的组成和所执行的功能离不开蛋白质参与,研究大脑蛋白质组学是研究大脑理想切入点。绘制大脑蛋白质图谱,找到疾病特异蛋白质会为药物开发、疾病诊断以及指导治疗提供帮助;也将为更高层次研究大脑蛋白质网络以及研究高级神经活动打下坚实的物质和理论基础。参考文献1. 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恶性肿瘤微转移的机制、检测及现状罗庆勇摘要:在恶性肿瘤治疗和预后研究中,转移是一个相当棘手的难题,也是影响肿瘤患者预后及判断其疗效的重要指标。近几年,恶性肿瘤转移的研究已发展到细胞及分子水平,肿瘤微转移概念也已逐步建立起来。有关微转移的机制目前主要有淋巴管生成、细胞因子的作用及微环境的改变等学说,肿瘤微转移研究已成为肿瘤研究的一个热点。肿瘤微转移的检测也日益被肿瘤专业界重视和关注。本文对恶性肿瘤微转移的机制、检测研究状况和目前所存在问题进行了相关的分析。 [关键词] 恶性肿瘤;微转移;机制;检测 临床上总有部分恶性肿瘤患者在首次手术治疗后尽管肉眼观无残留,并且在术后行常规放化疗,但仍可能在数月或数年复查原病灶及相关器官时发现有转移迹象。若能及时、准确判断有无肿瘤转移以及转移的范围,可大大提高肿瘤治疗的有效率,延长患者的生存期、改善其生存质量。通常来说,临床及常规病理检查很难发现微转移的肿瘤细胞,只有通过免疫组化或PCR等特殊检查才能及早发现和诊断。近几年来,恶性肿瘤的微转移检测已逐渐得到发展和重视,现就恶性肿瘤的微转移机制,检测及目前研究进展作一相关简要综述。1 恶性肿瘤微转移的概念 传统的肿瘤转移概念是指肿瘤病灶以外出现新的相同或类似病灶,常在原发灶发现数月和数年之后再被发现。而肿瘤微转移则是指在各种机体组织、体液及细胞移植物中检测到的镜下及亚显微水平的肿瘤残留,是用常规临床病理学方法不能检出的、隐匿在原发灶以外组织的、非血液系统恶性肿瘤的转移[ 1 ]。2 恶性肿瘤微转移的机制目前关于肿瘤转移主要存在两种学说,一是“种子与土壤假说”:认为是否形成肿瘤转移要看被转移部位组织的环境是否适宜原发瘤细胞的停留和生长。二是肿瘤异质性理论:该理论认为由于瘤细胞遗传性状的不稳定,由单克隆起源的瘤细胞在不断增殖的过程中会发生异质性,导致瘤细胞的转移潜能有高低之分[ 2 ]有关微转移的机制目前主要有淋巴管生成、细胞因子的作用及微环境的改变等学说。 进入90 年代以来,随着人们对肿瘤微血管研究的深入,发现恶性肿瘤转移与肿瘤的微血管生成密切相关。在这一领域的研究也越来越被相关专家所重视。 3 检测方法目前已建立的检测方法主要有形态学和非形态学方法两类。形态学方法有组织连续切片HE染色观察法,免疫细胞化学和免疫荧光技术;非形态学方法有流式细胞术,RT-PCR技术以及免疫-磁分离技术等[3] , 常规连续切片HE染色法 连续切片法一般用于淋巴结的微转移检测,其检出率与切片间距有很大关系,连续切片的细致分析,可从常规单张切片检查阴性的淋巴结中检出10%左右的微转移[ 4 ] ,而连续切片法一个标本需切几十至几百张切片,工作量大,临床难以推广,且对未形成转移灶的少量癌细胞难以检出,故近年来已很少使用。3. 2 免疫组化法 由于操作较简便,成本相对较低, 敏感性和特异性较高, 该技术较早应用于临床。但它的不足之处在于费时,较昂贵,且易出现假阳性、假阴性的问题。 3. 3 流式细胞术 流式细胞术的基本原理是用荧光标记的单抗与肿瘤细胞结合后,通过流式细胞仪即可检测到肿瘤细胞,它比起免疫细胞化学来说处理和扫描样品更快速、便捷。这一过程是完全自动化的,排除了主观因素的干扰。 3. 4 聚合酶链反应和逆转录聚合酶链反应( PCR 和RT-PCR) 该技术的原理是通过在患者的血液、淋巴结、骨髓中扩增出肿瘤细胞标志性基因或靶RNA来证实肿瘤细胞的存在。应用PCR技术可扩增存在于肿瘤细胞内的异常DNA。此技术的最大优点是其高度敏感性。随着新的肿瘤特异性标志物的发现, PCR反应条件的优化, RT-PCR有可能成为检测肿瘤微转移的常规方法。 3. 5 免疫磁分离 此乃新近建立的用于改进循环单个瘤细胞检测的方法。采用FITC2结合抗全细胞角蛋白单克隆抗体阳性细胞,与超顺磁抗-FITC微珠耦联,然后进入高梯度磁场与免疫磁性活化细胞筛选机。此方法比单纯采用RT-PCR或免疫组化法敏感性高10-100倍,从而减少了假阳性和假阴性。3. 6 免疫荧光技术 具有以下优点:(1)假阳性率低。(2)肿瘤细胞的绝对数目可确定并可同步量化。(3)可用微机存盘,且有可能重新定位,便于相关分析。(4)不但可进行体外细胞检测,还可进行活体微转移灶检测。肿瘤微转移研究存在的一些问题 肿瘤微转移是目前肿瘤研究的一个热点,尚处于资料积累和机制探讨阶段。当前存在的问题是一些被逐渐淘汰的微转移检测方法如常规细胞病理学和一些免疫组织化学方法等仍在继续应用,如用连续切片法检测淋巴结转移,乳腺癌和大肠癌。滥用标志物的现象也较普遍,如对某些肿瘤早已公认的几种标志物或其过时的检测方法仍在证明、分析比较它们的价值,而缺乏创新性研究的角度和层次[5 ]。恶性肿瘤微转移检测方法繁多,各种肿瘤检测标志物又是各种各样,其临床意义及预后指导价值等还需进一步证实和明确。此外,微转移检测的标准众多,因此,统一检测标准愈发显得重要。 参考文献:[ 1 ] 孙宁,尤云峰. 恶性肿瘤微转移的临床研究[ J ]. 临床肿瘤杂志, 2004, 9 (2) : 208-214.[ 2 ] Fidler IJ. Tumor heterogeneity and the biology of cancer invasion and metastasis[ J ]. Cancer Res, 1978, 38 (9) : 2651-2660.[ 3 ] 陈意生,史景泉等. 肿瘤分子细胞生物学[ M ].第2版 北京:人民军医出版社,52-55.[ 4] Mcguckin MA, Cummings MC,Walsh MD, et al. Occult axillary lymph node metastases in breast cancer , their detection and prognostic significance[ J ]. Br J Cancer, 1996, 73 (1) : 88-95.[ 5] 骆成玉, 祝学光. 肿瘤微转移检测研究的现状和存在的问题[J]. 基础医学与临床,2004,24(5):578-581.
—溴隐亭治疗泌乳素腺瘤 泌乳素腺瘤是垂体瘤的一种类型,发病率占到垂体腺瘤总数的40%以上。临床表现主要是:头痛,女性的月经紊乱、闭经,在非哺乳期乳房泌乳,男性患者主要表现在性欲下降、阳痿等。泌乳素腺瘤可根据自身大小分为微腺瘤、大腺瘤、巨大侵袭性腺瘤。 首先,来说说微腺瘤:肿瘤小于1cm的小瘤子就叫微腺瘤,临床女性多见,这并不是说男性的发病率低,而是由于人体内PRL水平升高早期会导致月经失调,甚至闭经,泌乳,很多女性患者是在进行妇科治疗时被发现患了垂体瘤,就此得到早发现早治疗的机会。而男性患者出现的症状多为性欲减退和性功能下降,多数患者甚至会认为和劳累、饮酒等多种外界因素有关,不加重视,忽略就诊。我的一个男性患者,在单位体检的时候发现了垂体瘤,肿瘤已经近4cm,在询问病史时,他才恍然大悟,原来困扰他多年的男科疾患竟源自这里。 再来说说微腺瘤的治疗:目前国内的学者对此意见不一,有的主张药物治疗,小剂量地使用溴隐亭抑制肿瘤的生长并使其萎缩。也有的主张在肿瘤尚未引起更为严重的症状前,采取经鼻腔-蝶窦入路手术切除,争取在短期内达到治疗的目的。对此众说纷纭,至今仍是各行其道。 究竟哪种治疗才是最适合微腺瘤的呢?先来说药物,药物可以缓解症状,抑制肿瘤生长,甚者使肿瘤消失,但其中绝大部分患者在停药后一段时间内发现停经泌乳等症状再次出现,经检查发现肿瘤复发,这是由于尽管显影的肿瘤因药物治疗萎缩到肉眼看不见了,但正常垂体组织中混有的肿瘤细胞还在伺机作乱,一旦停药,它们就会东山再起,跳出来捣乱,很像你进我退的敌我双方。所以几乎全部的患者都需要终生用药。我就曾遇到一位用药近10年的患者,一到门诊就坚决要求手术治疗,她说:“当时就是害怕开刀,才选择了吃药,开始还很好,1天1片,症状很快就减轻了,月经也恢复了,也不再泌乳了,尽管药的副作用让我恶心、呕吐,但并不严重,我还是庆幸自己的明智,逃过了挨一刀的难。可后来发现吃上就不能停了,因为只要停药月经就停,时间稍微长一点乳房就又开始流水,再继续吃药,原来的药量就不够了,而且效果也不明显,必须要在原来的基础上加大量才行,药量加大了,副作用也越来越厉害。我已经从开始的1片吃到现在的3片半,我很害怕,这样下去究竟什么时候是个头?”她的肿瘤很小,因为药物的原故近10年的时间仍然还是1cm左右,我为她进行了经蝶手术治疗,术中发现她的肿瘤质地比较硬、韧,这主要是由于长期药物治疗时肿瘤纤维化的原因,手术难度比同样大小直接选择手术治疗的垂体瘤患者要大很多。但治疗过程还是比较顺利的,住院3周之后她顺利康复出院,按照我们的医嘱定期复查内分泌和MRI,肿瘤没有再复发,她自己也很高兴,打电话告诉我,终于不用整日和药瓶子为伍了,看来最明智的选择还是手术。 对于垂体微腺瘤而言,我更倾向于首选手术治疗。尤其是对于未生育的女性而言,服用药物带瘤怀孕,导致流产的机率也远远高于正常孕妇,同时由于围产期女性雌激素水平升高,会刺激肿瘤生长,对于自身健康和日后生产都存在很多不安全隐患。要慎而为之。 第二个要说的是大腺瘤:直径大于1cm小于4cm,临床常见没有了性别的倾向。学术界关于它的治疗倒是比较统一,介乎于微腺瘤和巨大腺瘤之间,治疗也是手术和药物二者皆可。有的患者希望缩短治疗周期,比如我上面提到的那位体检发现肿瘤的朋友,他通过和我的交谈,详细了解了手术和药物治疗的利弊后,坚决要求选择前者。“我是个讨厌麻烦的人,吃药要吃那么久,太麻烦了,而且最后还是难逃这一刀,那还不如直接挨上一刀,反正也是麻醉睡着了做,我也不会觉得疼。”这样有勇气的患者还真是不多,不过他的分析也有一定的道理。大腺瘤的患者尽管早期可以选择药物治疗,但一段时间后肿瘤缩小到一定程度且PRL水平控制正常时,还是建议经蝶手术治疗,以免终生用药。也许有的朋友会说,这样的话直接选择手术好了,何必再浪费时间和精力去吃药呢?其实对于临床治疗而言,所有的外科手术,都是肿瘤越小,手术风险和因手术造成局部损伤而引起的术后并发症就越少。所以在这里,药物治疗还是有其深刻临床意义的。同时,对于那些年老体弱、自身存在手术禁忌证,而不能耐受手术的患者而言,采取药物控制肿瘤生长,无疑为他们日后的生活质量提供了很大程度的保障。 说到这里,不禁有朋友会问,微腺瘤手术好、大腺瘤吃药、开刀都行、难道没有一个能首选吃药的?我可以很负责任地告诉大家:有!就是马上要登场的泌乳素腺瘤中最后一类:巨大侵袭性腺瘤。 在垂体瘤诊断与治疗的连载二中我曾对这种肿瘤做过比较详细的描述:直径超过4cm,呈侵袭性生长,个头大,像强盗一样跑马占地,鱼肉毗邻。比如视神经,受压后引起双眼视力下降、视野变小,甚至失明。而垂体则被做为它的大本营,长期受压,导致周身乏力、性欲明显减退、甚者出现阳痿等垂体功能低下的临床表现。这样的病人查PRL时水平多高达1000ng/ml以上。临床男性多见,原因前面提到过:因为早期男性患者症状不明显,尽管多数病人或多或少存在不同程度的性欲减退和性功能功能减退,但多不被重视,容易延误治疗。或者到男科就诊,检查专科方面的问题,从而使真正的罪魁祸首成为漏网之鱼。包括上面那位要求坚决手术的患者,如果不是单位体检偶尔发现,我想他大概也会归属于这一类型。 既然查到了元凶,就不能再放任它逍遥法外,那么究竟那种治疗才能将之绳之以法?临床又是各执一词:有的学者沿袭较为传统的方式,认为首先采取手术治疗,达到视神经减压,缓解视力方面的症状后,再采取药物治疗。就好像先打击掉一小部分强盗,给他们一个警告,然后使用招安的方式,让他们慢慢弃恶从善。但这种方式风险比较大,难度也很大。侵袭性的肿瘤就像一贯嚣张的强盗,小小的教训不足以让其放下屠刀,除非长期大力度的压制,不然很快又会卷土重来。彻底切除几乎是不可能的,那术后的复发从某种意义上讲也是必然的。尽管药物可以控制大多数患者的肿瘤生长,但需要大剂量长期使用,其副作用和停药后的复发就像暗藏的敌人危机四伏。于是我提出另一种治疗方式,那就是首先选用药物治疗,通过药物抑制肿瘤的生长,使其慢慢萎缩,对于药物敏感的患者在用药几个月的时间内,即使不手术也会达到视神经减压的效果,严格按照医嘱定期监测内分泌水平,根据PRL降低的幅度调整用药,半年或一年后,通过复查的MRI可以发现,多数患者的肿瘤已经萎缩到可以采用经鼻-蝶手术的程度,这时再将残余肿瘤尽可能切干净,即使术后仍需小剂量药物辅助治疗,但多数不需要长期用药。这样一来将原本需要开颅的手术变成了通过鼻子就可以完成,不但大大降低了手术的风险还减少了术后复发的机率,同时患者的花销和所受的痛苦也大大低于传统的手术治疗,是我所推崇的首选治疗方式。 我的一个小病人就是这种情况,21岁的年轻小伙子,长了比鸡蛋还大的脑瘤自己一直不知道,来的时候还告诉我就是喝完酒头很痛,然后眼睛看不清楚了,经过MRI和内分泌的确诊,我建议他按照上述的方式首先采用药物治疗,又用打强盗给他举了例子:这么大的肿瘤就好像一大群占山为王的强盗,直接打击势必两败俱伤,不如先礼后兵,使用招安的方式瓦解分化强盗的内部核心,让其军心动摇、人心涣散,慢慢地化整为零。最后再对那一小撮冥顽不化的核心分子,采用彻底的毁灭性打击,让其自此一蹶不振,这样即使仍有极少一部分逃脱,但已元气大伤,无力回天了。之后只要实施适当的压制,就可以彻底消除潜在的隐患,回到国泰民安的太平盛世。小伙子很高兴地接受了我的建议,在服药仅半年后,“大鸡蛋”变成了“花生米”,我亲自为他做了手术,术后他摸着鼻子说:“我还没想到,原来吃药也能治脑瘤,幸亏听了您的话,要不我头上还要留下难看的疤。等复查的时候您一定好好给我看看,我脑袋里的强盗是不是都被消灭了。” 药物是治疗巨大侵袭性泌乳素腺瘤的首选方式,但并不是所有的患者都对这类药物敏感,换句话说,不是所有的患者都这么幸运。其中不乏一些尽管使用药物将PRL控制到正常,但肿瘤并不见缩小,对于这样的患者,恐怕手术就是唯一可以选择的治疗方式了。 其实,对于现代社会的快节奏生活而言,单单凭借适度的运动、合理的作息来维护我们的健康是远远不够的,就拿上述的垂体瘤来说,不论是药物还是手术,都是亡羊补牢,给我们的生活平添了许多苦难。只有定期为我们的身体作检查,让疾病在萌芽中被扼杀,才能够真正达到防患于未然,守住我们的健康!