微生物检验标本的正确采集及注意事项
正确采集临床微生物标本,直接影响到微生物培养鉴定结果。可靠的检验结果可以指导临床诊断治疗,为临床科学用药和成功的感染控制提供依据,是正确、合理使用抗菌药物,延缓细菌耐药,减少抗菌药物滥用和监测医院感染的第一步,也是最重要的一步。为此应正确采集各种细菌学标本。一、血液标本的采集 1、采集方法 (1)75%酒精清洁局部皮肤。 (2)待皮肤干后,再用2%—2.5%碘酒从穿刺点中心部位开始消毒,范围不应小于5cm(直径),且不能用手指触摸消毒后的皮肤。 (3)皮肤碘酒干后(约1min),穿刺采集血液,采血量成人5-10ml,婴幼儿1-5ml。 (4)采血后立即在床旁接种培养瓶,并迅速轻摇,充分混匀防止凝固,但又不可剧震以防溶血。 2、注意事项 (1)怀疑菌血症应尽早采血,体温上升(38.5℃)采血可提高阳性率,但也要防止因等待而延误时机。 (2)对已经使用抗菌药物,而又不能停药者,也应在下次用药前采血。切忌不要在静滴抗菌药物的静脉处采取血标本,也不能从静脉导管及动脉插管中取血。 (3)培养基与血液之比以10:1为宜,以稀释血液中的抗生素,抗体等杀菌物质;有人主张对接受抗菌药物治疗的病人,培养基与采血量之比可为20:1或大于这个比例。 (4)近年研究表明,将血液注入血培养基前,更换针头反而易导致污染。 (5)每例至少采血两次,间隔0.5-1h,以利于提高阳性率和区分感染菌与污染菌。 (6)疑为细菌性心内膜炎及布鲁氏病的病人,以肘动脉或股动脉采血为宜,除在发热期采血外,并要多次采血(24h 3-4次)和增加采血量(可增加10ml)。(7)采血后立即送检,如不能立即送检可置室温,而不能放置冰箱。(8)如临床表现很似败血症,而血培养多次阴性者,提示考虑厌氧菌和真菌感染的可能。二、骨髓的采集1、采集方法在病灶部位或髂前(后)上脊处严格消毒后抽取骨髓1ml,注入血培养瓶内。2、注意事项(1)骨髓内含有大量的单核巨噬细胞系统的细胞,因而骨髓培养对伤寒病人的诊断较血培养优越。(2)用于怀疑细菌性骨髓炎病人。三、静脉导管标本的采集 1、采集方法(1)常规导管部位皮肤消毒。(2)无菌方法从病人体内拔出静脉导管,剪下导管尖端5cm,放入无菌瓶中。(3)立即(15min内)送检,避免标本干燥。2、注意事项(1)剪下的导管立即接种血平皿,可提高阳性率。(2)肉汤反复冲洗导管腔内,冲洗液做定量培养。(3)有人将剪下的导管置肉汤增菌液或培养瓶中,此法不能区分导管感染菌与少量定植菌。(4)卫生部在《医学感染诊断标准》(试行)(2001年1月3日施行)中规定:导管管尖培养其接种方法应取导管尖端5cm,在血平板表面往返滚动一次。细菌≥15cfu/平板,即为阳性。四、呼吸道1、痰标本(1)采集方法①清晨起床后用凉开水漱口多次,以除去口腔内大量杂菌,用力咳出肺深部的脓痰,置于清洁干燥容器中送检。②痰量极少者可用45℃ 3%-10%的氯化钠溶液约25ml雾化。对于咯痰量少的幼儿,可轻轻压迫胸骨上部的气管,当其咯痰后用无菌棉棒采集标本。③咳嗽无力或昏迷病人,可用吸痰管经鼻腔或口腔经气管腔内吸引痰液送检。④气管切开者可以深入透气孔中取痰。⑤可用支气管镜直接在病灶部位采集高浓度的病原菌。⑥用无菌导管经鼻腔插入气管镜内,缓慢注入无菌蒸馏水5ml,取出导管。留取患者在3h内咳出的痰液,放入无菌容器中送检。⑦胃内采痰法。无自觉症状的结核病人。有时可把痰误咽入胃内,因而可采用胃内溶物做结核菌培养,其阳性结果比咯痰高10%左右,该方法于晨起空腹时,把灭菌的胃管,从鼻腔送入胃内,用20ml注射器抽取胃液。(2)注意事项①痰标本的采集以晨痰为准,此时患者痰量较多且含菌量也多。②标本采集后立即送检,若不能及时送检者,可暂存2-8℃冰箱。若晚1-2h接种,会失去苛氧菌,并使得革兰阴性菌过分生长。③可接受的标本:痰;支气管灌洗液,支气管刷,支气管活检;肺吸出物和肺活检。不能接受的标本:唾液;24h留的痰(结核杆菌培养除外);拭子。④痰标本的质量评价:(用显微镜筛选)在低倍镜下,检查鳞状上皮细胞,至少10个视野,集中在有白细胞处,合格标本为白细胞与鳞状上皮细胞比例大于2:1。2、鼻拭子(1)用湿的拭子(生理盐水);(2)需插两个鼻孔;(3)深入3.3cm左右,转动4-5次;(4)以上用于诊断金黄色葡萄球菌暴发时的鼻带菌者。3、咽拭子、口腔拭子(1)采集方法(到细菌室取专用拭子)①患者清水漱口后,由检查者将其舌外拉,用棉拭子将咽后壁或悬雍垂的后侧反复擦拭数次;②化脓性扁桃体炎、口腔念珠菌病时,直接用棉拭子在病灶部位擦拭;③插入运送培养基中立即送检,防止干燥。(2)注意事项 ①棉拭子应避免触及舌、口腔黏膜和唾液; ②采集标本前数小时不可用消毒药物漱口或接触病灶局部。五、胃肠道1、粪便(1)采集方法选取脓血、黏液粪便2-3g,液体粪便取絮状物1-2ml。盛于灭菌瓶中或蜡纸盒中及时送检。(2)注意事项①标本要采集新鲜的,陈旧标本影响阳性检出率;②切忌粪尿混合;③若要分离阿米巴,标本要立即送检并注意保温;④运送培养基可提高阳性率;⑤分离难辨梭菌时需选不成形或水样便;⑥霍乱弧菌、大肠杆菌Ο157感染的腹泻便则为水样便或血性便;⑦标本在病理早期或治疗前采集;⑧一般认为用抗菌药三天后,标本培养病原菌阴性。2、肛拭子 在无法获得粪便的情况下,可用经无菌甘油水或无菌生理盐水湿润的肛拭子插入肛门4-5cm(幼儿2-3cm)处,轻轻旋转擦取直肠表面黏液后取出,置运送培养基中送检。六、泌尿道根据卫生部《医学感染诊断标准》(试行)通知,泌尿系统临床诊断为:患者出现尿频、尿急、尿痛等尿路刺激症状,或有下腹触痛、肾区叩痛、伴或不伴发热,并具有下列情况之一:(1)尿检白细胞男性≥5个/高倍视野,女性≥10个/高倍视野,插导尿管患者应结合尿培养;(2)临床已诊断为泌尿道感染,或抗菌治疗有效而认定的泌尿道感染。1、中段尿(1)采集方法①女性 采样前用肥皂水或0.1%的高锰酸钾溶液冲洗外阴,用手指江阴唇分开排尿,弃其前段尿,不终止排尿,留取中段尿10ml于灭菌容器内。②男性 用肥皂水清洗尿道口,或0.1%的碘伏溶液消毒尿道口,灭菌纱布擦干,上翻包皮,弃其前段尿,不终止排尿,留取中段尿10ml于灭菌容器内。(2)注意事项①导尿虽然可以减少污染,但是多次重复导尿可以造成逆行性感染,因此近年来大多采用中段尿。②女性病人最好采取膀胱截石位由护士采取标本,减少污染。③采集标本以晨起第一次尿液为佳。④采集标本后,若不能在1h内送检,暂放4℃冰箱,但不能超过8h。若尿液标本在室温下放置超过2h,即使接种培养结果细菌数≥104 cfu/ml获103cfu/ml,也不能作为诊断依据,应重新留取标本送检。⑤疑为尿道炎时可将最初3-4ml尿液收集在灭菌容器内。该尿中即使有少数细菌,如反复检查为同一细菌,也应考虑为病原菌。⑥儿童在多数情况下,仅冲洗外阴是不够的,故采集标本较为困难。如果尿内细菌明显增多,可以高度怀疑为尿路感染,无菌则可否定。⑦若细菌培养结果为两种或两种以上细菌,需考虑污染可能,建议重新留取标本送检。⑧尿液中不得加入防腐剂,消毒剂否则影响阳性检出率。2、膀胱穿刺采集法避免污染是很困难的,培养结果与病情不符时,或尿厌氧菌培养,或婴幼儿中段尿采集困难时,可以用耻骨上穿刺膀胱内采尿。3、留置导尿者采集法拔去闭式引流的集尿袋,弃去导尿管前段尿液,留无污染的膀胱内尿液10ml送检。不可从集尿袋下端留取标本。七、脑脊液1、采集方法由临床医师以无菌方法收集脑脊液3-5ml(细菌1ml,真菌2ml抗酸杆菌2ml,病毒1ml)盛于无菌试管或小瓶中立即送检。2、注意事项 (1)采集标本后立即送检,因脑膜炎奈瑟菌离体后迅速自溶,肺炎链球菌及流感嗜血杆菌也易死亡; (2)疑为上述细菌感染时,应注意保温,不可置冰箱或低温保存。八、胆汁 1、十二指肠引流法 在无菌操作下,将十二指肠导管吞咽至十二指肠乳头部(距齿65-70cm)时,收集A液(来自总胆管,为橙黄或金黄色),随之注入25%硫酸镁溶液40ml,经1-2min后再采取B液(来自胆囊,为棕黄绿色),随后收取C液(来自肝胆管,为柠檬色),一般认为B液做细菌培养意义较大。2、胆囊穿刺法胆囊造影术时,可同时采取胆汁。3手术采取法由总胆管、胆囊直接穿刺采取胆汁。以上采集之标本应立即送检,否则置于4℃冰箱内,采集时需小心,避免被唾液、十二指肠液细菌污染。九、穿刺液标本穿刺液包括胸水、腹水、心包液、关节液、鞘膜液。1、采集方法由临床医师行穿刺术抽取。胸腹水可收集5-10ml,心包液、关节液收集2-5ml,置于无菌含抗凝剂的试管或小瓶中,充分混匀后,立即送检。抗凝剂10%EDTA二钠盐,标本与抗凝剂之比10:1。2、注意事项⑴标本采集应在患者用药之前或停止用药1-2天后进行;⑵不能立即送检可置4℃冰箱保存;⑶疑为淋病性关节炎患者的关节液,采集后立即送检,或床旁培养为佳;⑷不能用棉拭子浸蘸标本送检。十、脓汁及病灶分泌物1、伤口⑴表面伤口拭子采集方法及注意事项① 仅限于皮肤与皮下组织,包括手术切口、褥疮溃疡、新生儿脐炎、婴儿脓疮病。②用无菌生理盐水或75%的酒精擦去病灶表面渗液;③用无菌棉拭子抹去及较深部的脓汁分泌物或组织送检;④采集褥疮溃疡标本时应采集褥疮边缘的脓性分泌物,拭子放在运送培养基中立即送检,不要采集创口表面的渗液。⑵伤口、脓肿、窦道、坏疽组织采集方法及注意事项①闭锁性脓肿用碘酒和酒精消毒皮肤后,用灭菌注射器穿刺抽取全部脓液送检,疑为厌氧菌感染时,排去针管内空气将针头插入灭菌橡胶塞内送检;②伤口处若有脓及渗出物要用无菌棉签深入各种窦道中擦拭,用小刀刮取,穿刺抽吸或手术切除获得深处伤口标本;③当创伤出血时,敷有药物在2h以内及烧伤在12h内均不应采集标本,此时获得阳性结果机会甚少。④采集标本注意观察脓汁及分泌物性状、色泽、气味等。可为培养鉴定提供依据。⑶烧伤创面①烧伤创面需要脓性分泌物,焦痂迅速分离变棕黑、黑或紫罗兰色,烧伤边缘水肿。患者发烧>38℃或低体温衣原体,首先擦去眼结膜上面的分泌物,然后用无菌小刀刮取穹窿部及眼结膜上皮细胞,用链霉素处理后备用;⑶对于刚治疗或药物冲洗过的患者最好12-24h后采集标本;⑷对于泪囊炎患者可稍加挤压后以无菌棉拭子采集标本。检验科的医院感染管理检验科的医院感染管理应达到以下要求。⑴必须履行卫生部《医院感染管理规范(试行)》中第十七条的有关规定。建立健全本科室医院感染控制,防止微生物扩散及个人防护制度并严格执行。⑵布局合理,工作区与生活区分开,设置专门的清洗、消毒间并有明显的标记。⑶检验科的每个工作区应设有非手触式洗手设备并配备手消毒用品,操作完毕后,及时进行手的清洁与消毒。⑷保持室内清洁,操作台、各种物体表面及地面,每日必须进行两次常规清洁消毒,发生污染及时消毒。⑸无菌间和超净台必须保持清洁及定期消毒。无菌间应配备空气消毒设备,超净台的紫外线消毒灯应定期监测有效强度,按要求记录。⑹工作人员进入工作区必须穿工作服,戴工作帽,必要时穿隔离衣、胶鞋、戴手套并严格执行实验室操作规程。⑺严格执行无菌操作规程。静脉采血必须一人一针一巾一带;微量采血做到一人一针一管一片,对每位病人操作前应洗手或手消毒,禁止戴工作手套进入非工作区。⑻必须使用具有国家规定资质的一次性检验用品,并在有效期内使用。无菌物品如棉签、棉球、纱布等及其容器应在开启后24h内使用。⑼重复使用的器具用后,必须无害化彻底清洗干净后消毒或灭菌。⑽废弃的病原体培养基,菌、毒种保存液等,必须就地消毒灭菌,按医疗废物管理的有关规定转运、暂存或焚烧。⑾实验动物室必须按国家有关规定进行严格管理,防止动物逃逸或造成人与动物的交叉感染;实验后的动物,必须焚烧处理。⑿菌种、毒种按《中华人民共和国传染病防治法》管理。