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转载 艾滋病实验室检测

潘业 主任医师 厦门大学附属第一医院 感染性疾病科
2015-12-16 22971人已读
潘业 主任医师
厦门大学附属第一医院

    HIV/AIDS 的实验室检测主要包括HIV抗体检测、HIV核酸定性和定量检测、CD4+ T淋巴细胞计数、HIV耐药检测等。HIV⁃1/2抗体检测是HIV感染诊断的金标准,HIV核酸检测(定性和定量)也用于HIV感染诊断;HIV 核酸定量(病毒载量)和 CD4+ T 淋巴细胞计数是判断疾病进展、临床用药、疗效和预后的两项重要指标;HIV 耐药检测可为HAART方案的选择和更换提供指导。厦门大学附属第一医院感染性疾病科潘业

1.HIV⁃1/2 抗体检测:包括筛查试验和补充试验。HIV⁃1/2抗体筛查方法包括酶联免疫吸附试验(ELISA)、化学发光或免疫荧光试验、快速试验(斑点ELISA和斑点免疫胶体金或胶体硒、免疫层析等)、简单试验(明胶颗粒凝集试验)等。补充试验方法包括抗体确证试验(免疫印迹法,条带/线性免疫试验和快速试验)和核酸试验(定性和定量)。筛查试验呈阴性反应可出具HIV⁃1/2抗体阴性报告, 见于未被HIV感染的个体,但窗口期感染者筛查试验也可呈阴性反应。若呈阳性反应,用原有试剂双份(快速试验)/双孔(化学发光试验或 ELISA)或两种试剂进行重复检测,如均呈阴性反应,则报告为HIV抗体阴性;如一阴一阳或均呈阳性反应,需进行补充试验。

    补充试验:抗体确证试验无HIV特异性条带产生,报告HIV⁃ 1/2抗体阴性;出现条带但不满足诊断条件的报告不确定,可进行核酸试验或2~4周后随访,根据核酸试验或随访结果进行判断。补充试验 HIV⁃1/2 抗体阳性者,出具HIV⁃1/2抗体阳性确证报告。核酸试验:核酸定性检测结果阳性报告HIV⁃1核酸阳性,结果阴性报告HIV⁃1核酸阴性。病毒载量检测结果低于检测线报告低于检测线;>5 000拷贝/ml报告检测值;检测线以上但≤5 000拷贝/ml建议重新采样检测,临床医生可结合流行病学史、CD4+、CD8+T淋巴细胞计数或HIV抗体随访检测结果等进行诊断或排除诊断。

2.CD4+T淋巴细胞检测

    CD4+T淋巴细胞是HIV感染最主要的靶细胞,HIV感染人体后,出现CD4+T淋巴细胞进行性减少,CD4+/CD8+T淋巴细胞比值倒置,细胞免疫功能受损。目前常用的CD4+ T淋巴细胞亚群检测方法为流式细胞术,可以直接获得CD4+T淋巴细胞数绝对值,或通过白细胞分类计数后换算为CD4+T淋巴细胞绝对数。

    CD4+T淋巴细胞计数的临床意义:了解机体免疫状态和病程进展、确定疾病分期、判断治疗效果和HIV感染者的临床并发症。

    CD4+T淋巴细胞检测频率:需根据患者的具体情况由临床医师决定。一般建议:对于CD4+T淋巴细胞计数>350个/μl的(无症状)HIV感染者,每6个月应检测1次;对于已接受HAART的患者在治疗的第一年内每3个月检测1次,治疗 1 年以上且病情稳定的患者可改为每 6 个月检测 1 次。对于HAART后患者体内病毒被充分抑制、CD4+T淋巴细胞计数长期处于稳定水平的患者,CD4+T淋巴细胞计数在300~500个/μl的患者建议每12个月检测1次;>500个/μl的患者可选择性进行CD4+T淋巴细胞检测。对于发生病毒学突破患者、出现艾滋病相关临床症状的患者、接受可能降低CD4+T 淋巴细胞治疗的患者则需再次进行定期 CD4+T 淋巴细胞检测。CD4+/CD8+T 淋巴细胞比值倒置可在长期 HAART 后出现不同程度的改善,与患者起始治疗的时机和基础CD4+T淋巴细胞计数密切相关,其变化提示患者的治疗效果和免疫功能重建状态。

3. HIV 核酸检测:

     感染 HIV 以后,病毒在体内快速复制,血浆中可检测出病毒RNA(病毒载量),一般用血浆中每毫升HIV RNA的拷贝数或每毫升国际单位(IU/ml)来表示。病毒载量检测结果低于检测下限,表示本次试验没有检测出病毒载量,见于未感染HIV 的个体、HAART 成功的患者或自身可有效抑制病毒复制的部分HIV感染者。

    病毒载量检测结果高于检测下限,表示本次试验检测出病毒载量,可结合流行病学史、临床症状及HIV抗体初筛结果做出判断。测定病毒载量的常用方法有逆转录PCR(RT⁃PCR)、核酸序列依赖性扩增(NASBA)技术和实时荧光定量PCR扩增技术(real⁃time PCR)。     病毒载量测定的临床意义:预测疾病进程、评估治疗效果、指导治疗方案调整,也可作为HIV感染诊断的补充试验,用于急性期/窗口期诊断、晚期患者诊断、HIV感染诊断和小于18个月龄的婴幼儿HIV感染诊断。

    核酸检测(定性和定量):属于HIV检测中的核酸补充试验,核酸定性检测结果阳性,报告,HIV⁃1核酸阳性,结果阴性,报告HIV⁃1核酸阴性。b病毒载量检测结果低于检测线报告低于检测线;>5 000拷贝/ml 报告检测值;检测线以上但≤5 000拷贝/ml建议重新采样检测,临床医生可结合流行病学史、CD4+、CD8+T淋巴细胞计数或HIV抗体随访检测结果等进行诊断或排除诊断。

    病毒载量检测频率:如条件允许,建议未治疗的无症状HIV感染者每年检测1次、HAART初始治疗或调整治疗方案前、初始治疗或调整治疗方案初期每4~8周检测1次,以便尽早发现病毒学失败。HAART 患者病毒载量低于检测下限后,每3~4个月检测1次,对于依从性好、病毒持续抑制达2~3年以上、临床和免疫学状态平稳的患者可每6个月检测 1 次,但如出现 HIV 相关临床症状或使用糖皮质激素或抗肿瘤化疗药物则建议每3个月检测1次HIV载量。

4.HIV基因型耐药检测

    HIV耐药检测结果可为艾滋病治疗方案的制订和调整提供重要参考。出现HIV耐药,表示该感染者体内病毒可能耐药,同时需要密切结合临床情况,充分考虑HIV感染者的依从性,对药物的耐受性及药物的代谢吸收等因素进行综合评判。改变抗病毒治疗方案需要在有经验的医师指导下才能进行。

    HIV耐药结果阴性,表示该份样品未检出耐药性,但不能确定该感染者不存在耐药情况。

    耐药检测方法包括基因型和表型检测,目前国内外多以基因型检测为主。在以下情况进行HIV基因型耐药检测:HAART后病毒载量下降不理想或抗病毒治疗失败需要改变治疗方案时;进行HAART前(如条件允许)。对于抗病毒治疗失败者,耐药检测在病毒载量>400 拷贝/ml且未停用抗病毒药物时进行,如已停药需在停药4周内进行基因型耐药检测

节选自《中国艾滋病诊疗指南》(2018版)

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潘业 主任医师

厦门大学附属第一医院 感染性疾病科

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