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陈维 三甲
陈维 主任医师
上海市第十人民医院 心血管内科

专业解析何为心肌酶谱检查(三)

血清乳酸脱氢酶的测定:原理PH对其影响#e#

4.血清乳酸脱氢酶的测定:原理PH对其影响

LDH糖酵解酶,氧化还原反应

有五种同I酶LDH1-LDH5

一、LDH分布和特点:

广泛分布,主要在肾,其次心,骨骼肌,其它肝、脾、胰、肺,上述组织病变,血清中LDH。主要催化以下反应:

L-乳酸+NAD+丙酮酸+NADH+H+上海市第十人民医院心血管内科陈维

PH碱正反应(L-P)

PH中性逆反应(P-L)

二、方法学

(一)比色法:<实验>P122

1.原理:L-乳酸+NAD+LDH丙酮酸+NADH+H+

PH8.8

丙酮酸+2.4-二硝基苯肼→丙酮酸-2.4-二硝基苯腙

酸草黄色

加NaOH棕红色

颜色越深,酶活力越大

2.参考值:225-540u/dL

3.注意事项:产物生成量与反应时间不成比例

(1)标本严禁溶血因为RBC内LDH活力是血清内的100倍。

(2)LDH受重金属盐、EDTA、草酸盐的抑制。最好用血清标本

(3)血清标本2-6数天,室温48h

(4)准确性和重复性在酶学检验中最差,因为五种同I酶与底物结合能力不同,最适反应条件不同,在病理

LDH组成差异大,所以很难找出LDH最适反应条件。eg:心梗LDH1↑,肝病LDH5↑

(5)结果>2500u/dL,将标本稀释重做。

(二)连续监测法(酶法):<实验>P120

1.原理:L-乳酸+NAD+PH8.8-9.8丙酮酸+NADH+H+

逆反应比正反应速度快2-3倍所以反应偏向左侧,多用P-L

LDH

丙酸酸+NADH+H+乳酸+NAD+

PH7.4

340nm处监测,吸光度下降幅度与LDH成正比。

2.参考值:240-460u/L37℃

3.注意事项:

(1)逆反应优点:

a.试剂用量少,所需NAD+,只是L-P所用NADH+H+的3%,样品少

b.单位时间内吸光度变化大,逆反应线性范围较大,酶促反应速率比正反应快3倍,利于测定。时间短

c.酶活力随时间的线性关系较长

(2)正反应优点:

a.NADH+H+比NAD+稳定,价格低,易得到纯品。

底物L-乳酸与逆反应底物丙酮酸稳定

b.L-乳酸对LDH的抑制低于丙酮酸对LDH的抑制

(3)连续监测法可利用正、逆反应,优于比色法。

(4)金属离子的存在可以降低NAD+稳定性

试剂中可加入EDTA,使EDTA络合金属离子,增加NAD+稳定。

(5)NAD+不稳定,产生对LDH有抑制作用的物质。在碱性液中比在酸性液中稳定,在Tris缓冲液中比在磷酸

盐缓冲液中稳定。

(6)某些批号的NADH+H+还有LDH的物质,使用前检查NADH+H+质量,NADH+H+溶于Tris缓冲液,分别在

260nm和340nm测吸光度,应<2.3,若>2.3,说明含有在260nm处有吸收峰的杂质,如NAD+、腺苷。

(7)α-酮丁酸,羟基丙酮酸、乙醛酸可代替丙酮酸作底物。

(8)标本不能溶血

三、临床意义:

1.LDH↑:急性心梗、骨骼肌损伤、某些肝炎、白血病、肝硬化、阻塞性黄疸及恶性肿瘤。

2.心梗:12-24h,LDH↑,48-72h达高峰,1-2W后恢复正常

3.恶性肿瘤晚期LDH,恶性肿瘤引起的胸腹水中LDH↑

4.慢性肾小球肾炎、SLE、糖尿病肾病等病人中,尿LDH可达正常人3-6倍,尿中含多种抑制LDH活性物质,如尿素,

小分子肽类。

低PH值也可抑制LDH活性。

5.尿毒症患者LDH正常,透析后LDH↑,因为体内尿素较高。

 

eg:凝血酶原,凝血因子(X、ⅫI、Ⅶ)纤溶酶原,前激肽释放酶

假性胆碱脂酶:铜蓝蛋白,脂蛋白脂肪酶,肾素

假性胆碱脂酶:水解可能干扰乙酰胆碱脂酶活性的一些化合物

铜蓝蛋白:是一种氧化酶,与Fe蛋白,动员有关

脂蛋白脂肪酶:参与脂蛋白中脂肪的水解和储存

2.外分泌酶

eg:唾液和胰淀粉酶,胰脂肪酶,胃蛋白酶,胰蛋白酶和前列腺酸性磷酸酶等。

在血浆中很少发挥催化作用

其浓度与其分泌腺体的功能有关

3.细胞酶:存在于各细胞和组织中进行物质代谢的酶类

在血液中无重要的催化作用

(1)一般代谢酶:无器官特异性

(2)组织专一性酶:OCT、SDH、ADH主要存在于肝。其活性能较特异地反映肝cell的病变。

(二)根据酶促反应性质可将酶分为六类:

1.氧化还原酶类:催化底物进行氧化还原反应。eg:LDH

CHOCHO

C=0+NADH+H+LDHCH-OH+NAD+

COOHCOOH

丙酮酸乳酸

eg:LDH琥珀酸脱氢酶,细胞色素氧化酶,过氧化物酶

2.转移酶类:催化底物之间进行某些基团的转移或交换的酶类

COOHCH3COOHCH3

(CH2)2+HC-NH2ALT(CH2)2+C=0

C=0COOHHC-NH2COOH

COOHCOOH

α-酮戊二酸丙氨酸谷氨酸丙酮酸

eg:转氨酶、已糖激酶、磷酸化酶

3.水解酶:催化底物之间发生水解反应的酶类

eg:淀粉酶、蛋白酶、脂肪酶、磷酸酶

ALP

对-硝基苯酚磷酸盐对-硝基苯酚+磷酸盐

水解

4.裂解酶类:催化底物移去一个基因而留下双键的反应或逆反应的酶类。

eg:碳酸酐酶,醛缩酶

5.异构酶类:催化各种同分异构体之间互相转化的酶类

eg:磷酸已糖激酶,消旋酶

磷酸已糖激酶

6-磷酸葡萄糖6-磷酸果糖

6.合成酶类(连接酶类):催化两分子底物合成-分子的化合物,同时必须偶联有ATP磷酸键断裂。

二、血清酶的命名:

1.习惯命名法:根据酶来源,催化反应性质及底物来命名。

底物:淀粉酶,蛋白酶

性质:脱氢酶、转移酶

来源:胰淀粉酶、胃蛋白酶

底物+性质:谷草转氨酶

2.系统命名法:酶反应底物、性质均要列出,各底物间以“:”隔开

编号:(1)1为氧化还原酶类

2为转移酶类

3为水解酶类

4为裂解酶

(2)反应作用的位置,即可用于哪个基因

1.1-CH-OH

1.2-C=0

1.3-C=CH

1.4-C=NH

1.5-CH-NH2

1.6NADH、NADPH

(3)

1.1.1氯化还原酶CH-OH受体:NAD+NADP-

1.1.2氯化还原酶CH-OH受体:细胞色素

1.1.3氯化还原酶CH-OH受体:分子氧

三、血清酶的去路:

(一)血清酶的排泄:P234

1.尿路:是血清中低分子量酶类主要去路

2.胆汁不是血清酶排泄途径

(二)肝或网状内皮系统对血清酶的清除:

肝脏对以酶原形式存在的酶类有消除作用

(三)酶蛋白在血管内的失活和分解:

(四)转入其它体液

四、酶的活性单位及生理差异:

(一)酶的活性单位:在规定条件,每分钟催化1umol的基质发生转化所需要的酶量。

规定条件包括:温度、PH、缓冲系统、基质浓度及辅助因素

(二)酶的单位计算

1.根据标准计算:

(U/L)酶活力单位=A样品/A标准×C标准×Vt/Vs×1/t×1000

总体积-样品+基质

2.根据反应底物的消光系数:

酶活力=A样品/ξd×Vt/Vs×1/t×1000

消光系数比色杯厚度

(三)血清酶的生理差异:

1.性别:男>女

2.年龄:儿童磷酸酶>成人婴儿LDH2倍成人

3.进食:对酶活力本身无影响,但可影响比色时的浊度

4.活动:

5.妊娠:ALT、LDH、ALP↑

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陈维
陈维 主任医师
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